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【細胞名稱】人永生化角質(zhì)形成細胞

【細胞別名】HaCAT; HACAT; Hacat

【種屬來源】人

【組織來源】黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚

【細胞形態(tài)】上皮細胞樣

【生長特性】貼壁生長

【培養(yǎng)體系】DMEM+10% FBS+1% P/S

【傳代比例】1:2-1:4，每 2-3 天換液一次

【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；存儲條件：液氮

【安全性】建議在一級生物安全臺內(nèi)操作，并做好個人防護。

【用途】僅供科研使用

二、復(fù)蘇及傳代方法

1、細胞株的復(fù)蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速完全融化，并適當輕輕搖晃促融。快速、完全融化可以提高細胞的復(fù)蘇效果。

（2）打開凍存管前時用75%酒精擦拭細胞凍存管外壁。

（3）將完全融化的細胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細胞沉淀，然后用新鮮完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。

（4）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。

注意：如果收到的凍存管不能及時進行復(fù)蘇，還請置于-80℃或液氮中進行暫存，并盡快復(fù)蘇進行培養(yǎng)。

2、細胞株的復(fù)蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，看是否有異常；無異常后，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過夜。

（3）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，考慮進行換液或傳代，傳代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項

1、每支凍存管約含1×106個細胞，體積為1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個T25瓶或1個6cm培養(yǎng)皿中。如果復(fù)蘇后存活率較低，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細胞生長會更好

2、如果本產(chǎn)品是常溫運輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿完全培養(yǎng)液的貼壁細胞，收到細胞后：

（1）及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

（2）用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

（3）仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息。

（4）靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)。

3、如果細胞密度超過85%請盡快進行傳代操作；如果懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過夜以使懸浮的細胞再次貼壁。如果收到的是常溫運輸?shù)碾x心管裝的懸浮細胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在首次更換培養(yǎng)液時，保留一半原培養(yǎng)液，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導致細胞生長的不適應(yīng)，確保細胞良好的生長狀態(tài)。

4、細胞培養(yǎng)請在生物安全柜臺中進行操作，并嚴格遵守無菌操作。